產(chǎn)品名稱：NIBSC 06/206 人類乳頭瘤病毒(HPV)18型DNA(第一國際標準)
英文名稱：Human Papillomavirus (HPV) Type 18 DNA (1st International Standard)
品牌：WHO國際標準品NIBSC
類別：國際標準
| 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 貨期 | 銷售價 | 您的折扣價 |
|---|---|---|---|---|
| 06/206 | 1支 | 8周 | 3080 | 立即咨詢 |
- COA
- MSDS
1. 預(yù)期用途
用于核酸檢測的第一個 HPV 18 型 (HPV18) DNA 國際標準由冷凍干燥的重組質(zhì)粒 pBR322 含有通過其獨特的 EcoR1 位點克隆的全長 HPV18 DNA (Quint et al., 2006)。 EcoR1 克隆位點位于 E1 基因內(nèi)。該標準已在純化的人類基因組 DNA 的背景下配制，以 0.5 ml 等分試樣凍干并在 -20 °C 下儲存。該材料在一項涉及 19 個實驗室的國際合作研究中進行了校準（Wilkinson 等人，2010 年）。國際標準包含第三方專有的材料，應(yīng)僅用于內(nèi)部校準或工作用于擴增和檢測 HPV18 DNA 的標準。
本國際標準不得用于任何其他目的，并且使用后應(yīng)丟棄。
2. 注意
NIBSC 06/206 人乳頭瘤病毒18 型(標準品）
該制劑不適用于人類或動物人類食物鏈。
該材料含有源自 C33A 細胞的 DNA。和所有的一樣生物來源的材料，該制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。它應(yīng)該被使用和丟棄根據(jù)您自己實驗室的安全程序。這樣的安全程序應(yīng)包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。應(yīng)注意在打開安瓿或小瓶，以避免割傷。
3. 單元
HPV18 DNA 的第一個國際標準（NIBSC 代碼 06/206）已被規(guī)定為每安瓿 5 x 10^6 國際單位 (IU) 的單位。
可追溯性聲明：
它是在 2008 年 1 月的 WHO 會議上提出的（Ferguson 等人，
2009) HPV18 DNA 國際標準的使用說明包括用于確定用于制定國際標準的散裝材料的理論 HPV18 基因組當(dāng)量 (GEq) 的計算和假設(shè)，從而證明 1 IU 相當(dāng)于 1 HPV18 DNA 的 GEq。因此，第一個 WHO HPV18 DNA 國際標準的最終統(tǒng)一仍然是 IU，而可追溯性聲明將允許用戶將 IU 等同于 GEq。
在新墨西哥大學(xué) (UNM) 的 Cosette Wheeler 博士的實驗室中進行了重組 HPV18 質(zhì)粒儲備制劑的 DNA 濃度測定。 DNA濃度通過260 nm處的吸光度以及使用Picogreen測定法（Invitrogen Corporation，USA）的分光熒光法測定。在兩次 DNA 測量之間獲得了 0.95 或更高的相關(guān)系數(shù)。事先為了遞送至 NIBSC，將 HPV18 質(zhì)粒儲備制劑調(diào)整至 5 ng HPV18 質(zhì)粒 DNA/μl 的終濃度。 UNM 實驗室還向 NIBSC 提供了一份聲明，表明 HPV18 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.27 ng/μl。因此，5 ng HPV18 質(zhì)粒 DNA/ul 質(zhì)粒儲備液相當(dāng)于 3.937 x 1011 HPV18 GEq/ml。 NIBSC 使用這些數(shù)據(jù)制定了 HPV 18 型 DNA 的第一個國際標準。
為第 1 個國際標準制定散裝材料HPV 18 型 DNA（NIBSC 代碼 06/206）：
在 NIBSC，大塊 HPV18 質(zhì)粒 DNA 材料是根據(jù)公式：
HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質(zhì)粒原液 x 體積質(zhì)粒原液)/體積散裝材料。
因此，HPV18 GEq/ml 散裝材料 = (3.937 x 1011 HPV18 GEq/ml 質(zhì)粒原液) x (0.04826 ml HPV18 質(zhì)粒原液) / 1900 ml HPV18 散裝材料 = 1.0 x 107 HPV18 GEq/ml 散裝材料隨后將 HPV18 DNA 散裝材料以 0.5 ml 等分試樣冷凍干燥。
第一次將 IU 等同于 GEq 需要某些假設(shè)HPV18 DNA 國際標準： 1) HPV18 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.27 ng/μl； 2) 凍干后 HPV18 DNA 的活性沒有損失； 3）重組HPV18質(zhì)粒DNA準確模擬了生物樣本中HPV18病毒DNA的活性。
獨立計算重組 HPV18 質(zhì)粒的 GEq/ml脫氧核糖核酸。
NIBSC 還使用 BioEdit 序列比對編輯器 v7.0.5.3 (Tom Hall, Isis 制藥公司，美國）。用于確定分子量的序列是 GenBank
pBR322 的登錄號 J01749.1 和參考序列 HPV18（登錄 X05015）。
生物編輯數(shù)據(jù)DNA分子：HPV18登錄X05015
長度 = 7857 個堿基對
MW= 4763530.00 道爾頓，雙鏈
DNA分子：克隆載體pBR322
長度 = 4361 個堿基對
MW= 2653867.00 道爾頓，雙鏈
公式
根據(jù)以下公式計算 HPV 質(zhì)粒原液的 GEq/ml：
HPV 質(zhì)粒原液的 GEq/ml = (HPV 質(zhì)粒原液的 DNA 濃度) x (HPV DNA 的 MW + pBR322 的 MW)-1
x (阿伏伽德羅數(shù)) 其中阿伏伽德羅數(shù) = 6.022x1023 分子/mol GEq/ml 大量 HPV DNA 材料根據(jù)以下公式計算：
HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質(zhì)粒原液 x 體積質(zhì)粒原液)/體積散裝材料。
計算
將重組 HPV18 質(zhì)粒原液提供給 NIBSC濃度為 5 ng/μl，因此 HPV18 質(zhì)粒的 GEq/ml庫存是：
= (5 x 10-9
g/μl) x (mol/(7417397 g) x (6.022x1023 分子/mol)
= 4.059 x 108 分子/μl
= 4.0591 x 1011 分子/ml
= 4.059 x 1011
HPV18 GEq/ml
將 48.26μl 重組 HPV18 質(zhì)粒原液稀釋至終體積為 1900ml，因此：
HPV18 GEq/ml 散裝材料 = (4.059 x 1011 HPV18 GEq/ml 質(zhì)粒原液) x (0.04826 ml HPV18 質(zhì)粒原液) / 1900 ml HPV18 散裝材料= 1.031 x 107 HPV18 GEq/ml 散裝材料
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NIBSC 06/206 人乳頭瘤病毒18 型(標準品）
4. 內(nèi)容
生物材料原產(chǎn)國：英國。
每個安瓿含有 0.5 ml HPV18 質(zhì)粒 DNA 的凍干當(dāng)量，稀釋在 10 mM Tris 緩沖液 pH7.4 中，含有 1 mM EDTA、5 mg/ml 海藻糖和約 1 x 106 人 Geq/ml C33a 細胞。
5. 存儲
收到時，安瓿瓶應(yīng)存放在 -20 °C 或以下。
請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料。
6. 開瓶指南
DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）末端的材料，然后按照安瓿隨附的制造商說明進行操作
7. 材料的使用
在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分。
HPV18 DNA 的第一個國際標準包含高拷貝數(shù)模板。 HPV18質(zhì)粒的風(fēng)險很高，打開玻璃安瓿時通過霧化造成 DNA 污染。材料必須在單獨的實驗室環(huán)境中打開和處理，遠離試劑、實驗室器具和樣品等其他預(yù)放大組件。
該材料以凍干形式提供，使用前應(yīng)在 0.5 ml 無菌無核酸酶水中復(fù)溶。確保安瓿的內(nèi)表面被添加的水潤濕，以便重組粘附在玻璃上的任何凍干材料顆粒。
重組材料的最終濃度為 1 X 10^7 IU/mL。
重組材料適用于校準內(nèi)部或工作標準，用于擴增和檢測 HPV18 DNA(WHO/IVB/10.12)。該材料不應(yīng)用于校準或評估提取、沉淀或離心程序。 NIBSC 可以為在提取步驟無法與擴增步驟分離的分析中使用 06/206 提供指導(dǎo)（例如進樣、應(yīng)答平臺）。該材料尚未針對人類 DNA 核酸擴增技術(shù)進行校準。
NIBSC 06/206 人乳頭瘤病毒18 型(標準品）
陳經(jīng)理（銷售）
